不可以 。因为南京长江三桥是高速公路专用桥，行人、非机动车、摩托车、拖拉机等都不允许上桥 。
【南京长江三桥可以骑自行车吗】南京长江三桥位于现南京长江大桥上游约19千米处的大胜关，南岸起点在绕城公路刘村互通，往东接南京市规划的二环线，北岸终点为浦口境内的宁合高速公路张店互通，往北接宁淮高速公路 。2005年10月南京长江第三大桥建成通车 。全长约15.6公里，其中跨江大桥长4744米，主桥跨径648米，是世界上第一座人字弧线形钢塔斜拉桥 。
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